搖瓶液體菌種制作工藝

一 液體培養(yǎng)基配方：葡萄糖 20克? 蛋白胨 10克? 硫酸鎂 0.5克? 硫酸二氫鉀 1克? 水 1000ml

二 液體培養(yǎng)基的制作步驟 ：

1 稱量 溶解：按配方稱量藥品，將藥品置于燒杯中加水，玻璃棒攪勻。

2 分裝：分裝三角瓶時避免培養(yǎng)液黏住瓶壁口，用漏斗進行分裝，三角瓶裝料系數(shù)60％。

3 加棉塞：棉塞大小，松緊度要適中，一般塞入3-4厘米。

4 裝鍋滅菌：塞好棉塞的三角瓶用雙層報紙包扎好，裝入滅菌鍋，蓋上報紙，排氣后，待溫度升至121℃開始計時，溫度控制在121—123℃，維持50min。

5 烘棉塞：當壓力降至0.05MPa時帶壓進入無菌室，當壓力即將降至零時開始放氣，打開鍋蓋拿出報紙，將鍋蓋嵌一小縫，以此來烘干棉塞， 維持40—50min。

6 冷卻：取出三角瓶放在超凈工作臺或接種箱中，冷卻后進行接種。

三 接種工藝 ：

A 母種為試管菌種的接種工藝

1 選取新培養(yǎng)好的試管斜面菌種1支（若從冰箱中取出需提前24小時活化），松動三角瓶的棉塞，以備接種方便，在酒精燈火焰旁將棉塞順時針旋轉(zhuǎn)松動，放在一旁，拿起接種鉤在火焰上燒紅，并慢慢傾斜灼燒，接種時伸入試管瓊脂下部，快速冷卻，除去菌種前端菌絲和氣生菌絲。

2 右手拔出三角瓶棉塞握在手里，用接種鉤挑取斜面的50%切成4×4mm的接種塊5-6塊，迅速放入三角瓶中。

3 試管菌種迅速放回酒精燈旁，接種鉤也放回試管中，棉塞再次塞入時要經(jīng)過灼燒。

4 取雙層報紙包扎好瓶口，在三角瓶上貼好標簽，注明菌種明稱，培養(yǎng)基配方，接種日期，然后放到搖床上進行培養(yǎng)。

5 清潔超凈工作臺。

B 母種為平皿菌種的接種工藝

1 選取新培養(yǎng)好的平板菌種一個（若從冰箱中取出需提前24小時活化），松動三角瓶的棉塞，以備接種方便，在酒精燈火焰旁將棉塞順時針旋轉(zhuǎn)松動，放在一旁，而后在酒精燈旁將平板封口膜撕掉，拿起接種鉤在火焰上燒紅，并慢慢傾斜灼燒，接種時將平皿蓋打開放在一旁，在平板菌種上進行劃線（中間接種塊不納入接種部分）平均接種塊為0.5*0.5cm，劃線后接種鉤暫放在試管架上。

2 右手拔出三角瓶棉塞握在手里，用接種鉤挑取4-5塊接種塊，迅速放入三角瓶中。

3平板菌種迅速放回酒精燈旁，接種鉤也放回平皿中，棉塞再次塞入時要經(jīng)過灼燒。

4 取雙層報紙包扎好瓶口，在三角瓶上貼好標簽，注明菌種明稱，培養(yǎng)基配方，接種日期，然后放到搖床上進行培養(yǎng)。

5 清潔超凈工作臺。

四 液體菌種的培養(yǎng)：

1 三角瓶置于搖床上或者磁力攪拌器上進行培養(yǎng)，溫度控制在23—24℃，轉(zhuǎn)速或頻率逐漸升高。

2 定時觀察培養(yǎng)液顏色，菌球形態(tài)，如發(fā)現(xiàn)異常立即進行鑒定（測ph，鏡檢菌絲，取樣培養(yǎng)）。

3 菌齡一般控制在6—8天，此時培養(yǎng)液內(nèi)出現(xiàn)大量菌球，培養(yǎng)液呈黃白色，帶有蘋果酸味道。

4 將培養(yǎng)好的液體種子進行綜合檢測后供給發(fā)酵罐進行接種，待發(fā)酵罐接種后同時對液體種子進行鏡檢、空培養(yǎng)、取樣。